PRODUÇÃO DE EMBRIÕES BOVINOS in vitro EM MEIO DE CULTURA COM ÁCIDO ASCÓRBICO - Ferro, Aline Consani; Silva, Camila da; Calegari, Renata Sanches; Crespilho, André Maciel; Martins Jr., Alicio (Veterinária e Zootecnia, 2023)
Este estudo foi conduzido para verificar os efeitos da adição de ácido ascórbico (AA) ao meio BARC utilizado para cultura in vitro de embriões bovinos. Folículos (2 a 7 mm de diâmetro) de ovários obtidos em frigorífico foram aspirados, e oócitos com no mínimo 3 a 4 camadas de células do cumulus e citoplasma homogêneo foram lavados três vezes em meio de maturação base (MM-b). Grupos de 15 a 25 oócitos foram maturados em gotas (100 mL) de MM-b, acrescido de 1 mg/mL de FSH (Folltropin) e 10% de SFB, sem PVA, por 24 horas. O meio m-DM foi utilizado tanto para o “swim-up” quanto para a fertilização in vitro; oócitos e espermatozóides foram co-incubados por 5 horas. A seguir, as células do cumulus foram removidas e prováveis zigotos foram cultivados em gotas (50 mL) de meio BARC (experimento 1), suplementado com AA nas concentrações de 0, 0,1, 1 e 10 mg/mL, durante a etapa 1 (5 a 72 horas pós-inseminação; h pi). No experimento 2 e 3, as mesmas concentrações de AA foram adicionadas ao meio BARC, respectivamente nas etapas 2 (72 a 144 h pi) e 3 (144 a 192 h pi). Oócitos e embriões foram incubados em estufa de CO2 a 5%, 38,5°C e atmosfera úmida. O desenvolvimento embrionário foi monitorado e oócitos maturados que fertilizaram e atingiram os estágios de mórula, blastocisto e blastocisto expandido foram registrados às 72, 144, 168 e 192 h pi, respectivamente, de acordo com as condições experimentais definidas. ANOVA e teste t de Bonferroni foram empregados para as análises estatísticas, com p<0,05 aceito como significativo. No experimento 1, o AA na concentração de 10 mg/mL produziu uma maior (p<0,05) porcentagem de mórulas (53,7%), blastocistos (37,2%) e blastocistos expandidos (28,1%) do que os demais tratamentos, com resultados similares entre estes. Nenhuma diferença significativa foi observada entre os tratamentos nos experimentos 2 e 3 para qualquer um dos estágios de desenvolvimento embrionário. Concluindo, a adição de ácido ascórbico ao meio de cultura BARC aumentou a produção de embriões bovinos in vitro, provavelmente devido à sua função de prevenir ou diminuir os danos causados pela oxidação.