OTIMIZAÇÃO DE PROTOCOLOS LABORATORIAIS APLICADA À VIGILÂNCIA MOLECULAR DE LEISHMANIA SPP.

Autores

DOI:

https://doi.org/10.35172/rvz.2026.v33.1799

Resumo

As leishmanioses são zoonoses vetoriais negligenciadas e representam um importante problema de saúde pública. A Leishmaniose Visceral (LV), causada por protozoários do gênero Leishmania, apresenta ampla distribuição em áreas urbanas, tendo o cão doméstico como principal reservatório. Este estudo objetivou padronizar, comparar e otimizar diferentes meios de cultura, volumes de cultivo e métodos de extração de DNA, associados a técnicas moleculares, visando aprimorar a vigilância molecular da Leishmania spp., principalmente em regiões endêmicas. Foram analisadas amostras biológicas de 15 cães naturalmente infectados e reagentes para LV em inquérito sorológico no município de Bauru, São Paulo, Brasil. Amostras de soro apresentaram 100% de positividade no teste Dual Path Platform (DPP) e 86,7% no ensaio imunoenzimático (ELISA). Punções de linfonodo, baço, fígado e medula óssea foram cultivadas em diferentes meios: bifásico NNN (Novy-MacNeal-Nicolle) + BHI (Infusão de Cérebro e Coração) suplementado com gentamicina e urina; bifásico BAB (Blood Agar Base) + Schneider, BHI e soro fetal bovino; em meio M199 suplementado com soro fetal bovino, gentamicina e urina; e em meio LIT (Infusão de Fígado e Triptose), sendo estes últimos avaliados em volumes de 8 mL e 600 µL. O volume reduzido apresentou melhor desempenho no isolamento de promastigotas, especialmente no meio M199. O DNA foi extraído a partir de alíquotas das culturas por métodos manual e automatizado, sendo observadas maiores concentrações de ácidos nucleicos nas extrações automatizadas. Na PCR convencional (cPCR), utilizando primers LinR4 e Lin19, verificou-se positividade de 77% nas extrações manuais e 96% nas automatizadas. Os resultados demonstram o potencial das condições laboratoriais avaliadas para aprimorar o isolamento parasitário e a detecção molecular de Leishmania spp. em cães, contribuindo para a otimização e padronização de protocolos laboratoriais aplicados à vigilância molecular em áreas endêmicas.

Biografia do Autor

Gabrielle dos Santos Rocha, Instituto Adolfo Lutz, Centro de Laboratório Regional II, Bauru

Médica Veterinária graduada pela FMVZ-Unesp Botucatu (2016-2021), com sólida experiência em Saúde Pública, Vigilância Epidemiológica e Diagnóstico Laboratorial de Zoonoses. Atuou em Residência na área de Zoonoses e Saúde Pública pela mesma instituição (2021 - interrompida em 2022), com foco no diagnóstico sorológico e molecular de agentes de relevância em saúde pública, incluindo a Raiva Animal. Como médica veterinária servidora pública (2022-2025), foi responsável pela coordenação de ações de vigilância e controle de zoonoses, manejo populacional e inspeção sanitária. É especialista em Vigilância Laboratorial em Saúde Pública pelo Instituto Adolfo Lutz (2025), com experiência em técnicas de isolamento e detecção molecular (PCR) de Leishmania spp. Atualmente é bolsista de Treinamento Técnico nível IV (FAPESP) pelo Institut Pasteur de São Paulo, na área de diversidade viral, ecológica e evolutiva de agentes virais em morcegos e outros animais silvestres da fauna brasileira.

José Eduardo Tolezano, Instituto Adolfo Lutz, Centro de Parasitologia e Micologia, São Paulo, Brasil

Possui Doutorado em Ciências (Biologia da Relação Patógeno-Hospedeiro) pela Universidade de São Paulo (2000), Mestrado em Ciências Parasitologia pela Universidade de São Paulo (1990), Especialização em Entomologia Epidemiológica pela Universidade de Sâo Paulo (1979), Graduação em Ciências Biológicas pela Universidade de Guarulhos (1977), além de vários treinamentos em zimotaxonomia (Instituto Evandro Chagas/The Wellcome Parasitology Unit-1981 e Laboratório de Zimotaxonomia-Instituto Oswaldo Cruz- 1991) e diagnóstico molecular de tripanossomatídeos (Departamento de Parasitologia-ICB/USP - 2000). Atualmente é Pesquisador Científico Senior e Diretor Técnico do Centro de Parasitologia e Micologia do Instituto Adolfo Lutz, Professor/Orientador (Mestrado/Doutorado) do Programa de Pós-Graduação em Ciências da Coordenadoria de Controle de Doenças da Secretaria da Saúde do Estado de São Paulo; ex-Membro e ex-Presidente de órgão colegiado - CPRTI - Secretaria de Gestão Pública de São Paulo, órgão co-responsável pela formulação e gestão de políticas públicas de C&T e avaliação da produtividade técnico-científica dos Pesquisadores Científicos dos Institutos de Pesquisa Científica e Tecnológica das Secretarias de Agricultura, Meio Ambiente, Saúde e de Planejamento do Estado de São Paulo. Membro do Comitê de Controle da Leishmaniose Visceral Americana no Estado de São Paulo. Presta assessoria científica em Leishmanioses para o Ministério da Saúde. Relator ad hoc de Instituições de Fomento à Pesquisa e Revistas Científicas. Tem experiência na área de Parasitologia, com ênfase em Protozoologia Parasitária Humana, atuando principalmente nos seguintes temas: Epidemiologia e Diagnóstico laboratorial; Leishmaniose Tegumentar Americana, Estado de São Paulo, Leishmaniose Visceral Americana, Estados de Mato Grosso do Sul e São Paulo, Doença de Chagas e Trypanosoma cruzi. Atualmente é o Coordenador de Rede Estadual de Laboratórios para o Diagnóstico das Leishmanioses do Instituto Adolfo Lutz. Entre suas linhas de pesquisa inclui ainda temas relacionados à Entomologia Forense.

Vanessa Campos Paizan, Instituto Adolfo Lutz, Centro de Laboratório Regional II, Bauru

Mestrado Acadêmico no Programa de Pós Graduação em Doenças Tropicais - Universidade Estadual Paulista (UNESP) Botucatu -SP 2024 - 2026. Especialização em Vigilância Laboratorial em Saúde Pública - Vigilância Epidemiológica Instituto Adolfo Lutz (IAL) - Bauru - SP 2022 - 2023. Treinamento Técnico T3 FAPESP 2021 - 2022. Medicina Veterinária - Universidade Paulista (UNIP) - Bauru - SP 2016 - 2020. Experiencia em Clínica Médica de Pequenos Animais, Castração, Zoonoses, Diagnóstico Molecular - PCR. Atua em linhas de pesquisa de Zoonoses e Saúde Pública

Valéria Medina Camprigher, Secretaria da Saúde, Prefeitura Municipal de Bauru

Possui graduação em Medicina Veterinária pela Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (1983). Mestrado em Clínicas Veterinárias pela Universidade Estadual de Londrina (2017) e Doutorado em Doenças Tropicais pela Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho-Faculdade de Medicina (2023). Tem experiência na área de Medicina Veterinária, com ênfase em Clínica e Cirurgia de Animais de Companhia. Atuou na área de Vigilância Sanitária na Prefeitura Municipal de Bauru e atualmente trabalha na Divisão de Vigilância Ambiental-Seção de Controle de Zoonoses.

Gabrielle Pires de Morais Monari, Instituto Adolfo Lutz, Centro de Laboratório Regional II, Bauru

Doutoranda no Programa de Pós-Graduação em Biologia Geral e Aplicada (2025) pelo Instituto de Biociências da UNESP de Botucatu (IBB-UNESP), desenvolvendo pesquisa sobre a influência de agroquímicos azólicos ambientais nos fatores de virulência e no perfil de resistência de isolados clínicos de Candida parapsilosis e Candida tropicalis. É mestre em Biologia Geral e Aplicada (2023-2025) pela mesma instituição, com projeto voltado ao estudo de leveduras patogênicas do gênero Trichosporon, realizado no Instituto Adolfo Lutz CLR II (Bauru). Possui especialização em Vigilância Laboratorial em Saúde Pública (2022-2023), com atuação no laboratório de Micologia do IAL-Bauru. Foi bolsista do PET-Saúde Interprofissionalidade (2019-2021), atuando em unidades de saúde da SMS/Bauru em ações integradas com profissionais da saúde. Durante a graduação em Ciências Biológicas (2015-2018), participou de projetos de extensão com foco em divulgação científica. Tem experiência nas áreas de micologia médica, virulência e resistência a antifúngicos.

Laís Ferreira Inácio, Instituto Adolfo Lutz, Centro de Laboratório Regional II, Bauru

Mestranda pelo programa de Doenças Tropicais da Faculdade de Medicina pela Universidade Estadual Paulista ''Júlio de Mesquita Filho'' campus Botucatu (2025 - Atual). Especialista em Vigilância Laboratorial em Saúde Pública pelo Centro de formação de Recursos Humanos para o SUS/SP (2024).Graduada no curso de bacharelado e licenciatura em Ciências Biológicas pela Universidade Estatual Paulista ''Júlio de Mesquita Filho'' campus Bauru (2019 - 2024).

Henrique Gualtieri Crisci, Instituto Adolfo Lutz, Centro de Laboratório Regional II, Bauru

Bacharel e Licenciado em Ciências Biológicas pela Universidade Estadual Paulista ''Júlio de Mesquita Filho'' (UNESP). Especialista em Vigilância Laboratorial em Saúde Pública com ênfase em Vigilância Epidemiológica pelo Instituto Adolfo Lutz CLR II (Bauru-SP), onde desenvolveu estudos acerca da sensibilidade de diferentes espécies de Candida a determinados antifúngicos clínicos. Atualmente é mestrando pelo programa de Pós-graduação de Biologia Geral e Aplicada, pertencente ao Instituto de Biociências (IBB) da UNESP (Botucatu).

Luciana da Silva Ruiz , Instituto Adolfo Lutz, Centro de Laboratório Regional II, Bauru

Formada em Biologia pela Unesp/Bauru (1996), realizou especialização em Micologia Médica pela Faculdade de Medicina da Unesp/Botucatu (2000). Mestrado (2003), Doutorado (2008) e Pós-Doutorado (2013) em Microbiologia pelo Instituto de Ciências Biomédicas da USP. Participa como pesquisador colaborador em projetos de pesquisa na Faculdade de Odontologia-Departamento de Estomatologia e no Instituto de Ciências Biomédicas - Departamento de Microbiologia da USP . Ganhou prêmios em trabalhos apresentados em congressos e em publicação cientifica. Trabalhou como docente na Universidade Nove de Julho (2008-2010), ministrando as disciplinas de Microbiologia Básica e Microbiologia Clínica e orientando alunos em trabalhos de conclusão de curso. Participou e proferiu palestras em congressos nacionais e internacionais. Participou de bancas examinadoras e de cursos de pós-graduação como professor convidado. Presta assessoria ad hoc a periódicos nacionais e internacionais de divulgação científica, para agências de fomento, bem como contribui para revisão científica de capítulos de livros para editoras. Atualmente é Pesquisador Científico VI do Instituto Adolfo Lutz, regional Bauru. Docente do curso de Pós-Graduação em Biologia Geral do Instituto de Biociências da UNESP/Botucatu-SP orientando alunos de mestrado e doutorado. Experiência em pesquisa na área de Micologia Médica, atuando principalmente nos seguintes temas: Candida, Trichosporon, leveduras patogênicas, antifúngicos, fatores de virulência e tipagem molecular.

Virginia Bodelão Richini-Pereira, Instituto Adolfo Lutz, Centro de Laboratório Regional II, Bauru

Possui graduação em Ciências Biológicas pela UNESP- Bauru(2001) e em Gestão Pública pela UNIVESP (2022), mestrado em Ciências Biológicas (Farmacologia) pela UNESP-Botucatu (2004) e doutorado em Biologia Geral e Aplicada pela UNESP-Botucatu(2009). Pós-doutorado na UAH-Alcalá de Henares-Espanha (2011) e na Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da UNESP-Botucatu (2012). Especialização em Gestão em Saúde UAB-UNESP (2014). Atualmente é Pesquisador Científico PqC-VI e Diretor Técnico de Saúde II do Instituto Adolfo Lutz, Centro de Laboratórios Regionais - Bauru. É professor permanente do Programa de Pós-Graduação em Doenças Tropicais da Faculdade de Medicina - UNESP-Botucatu.Tem experiência na área de Biologia molecular e Microbiologia, atuando nos seguintes temas: eco-epidemiologia de micro-organismos, animais silvestres e zoonoses.

Referências

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Publicado

2026-07-28

Como Citar

1.
dos Santos Rocha G, Tolezano JE, Campos Paizan V, Medina Camprigher V, Pires de Morais Monari G, Ferreira Inácio L, et al. OTIMIZAÇÃO DE PROTOCOLOS LABORATORIAIS APLICADA À VIGILÂNCIA MOLECULAR DE LEISHMANIA SPP. RVZ [Internet]. 28º de julho de 2026 [citado 4º de agosto de 2026];33. Disponível em: https://rvz.emnuvens.com.br/rvz/article/view/1799

Edição

v. 33 (2026): Veterinária e Zootecnia

Seção

Artigos Originais

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Copyright (c) 2026 Gabrielle dos Santos Rocha, José Eduardo Tolezano, Vanessa Campos Paizan, Valéria Medina Camprigher, Gabrielle Pires de Morais Monari, Laís Ferreira Inácio, Henrique Gualtieri Crisci, Luciana da Silva Ruiz , Virginia Bodelão Richini-Pereira

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