Producción de Embriones Bovinos in vitro en Medio de Cultura con Ácido Ascórbico

Resumen

Este estudio fue realizado para verificar los efectos de agregar ácido ascórbico (AA) al medio BARC de cultura in Vitro de embriones bovinos. Folículos (2 a 7 mm de diámetro) de ovarios obtenidos en frigorífico fueron aspirados y oocitos con un mínimo de 3 a 4 capas de células de cunulus y citoplasma homogéneo fueron lavados tres veces en un medio de maduración base (MM-b). Grupos de 15 a 25 oocitos fueron madurados en gotas (100 μl) de MM-b, adicionadas de 1 μg/ml de FSH (Folltropin) y un 10% de SFB, sin PVA, por 24 horas. El medio m-DM se utilizó tanto para el “swim-up” como para la fertilización in Vitro; oocitos y espermatozoides fueron co-incubados por 5 horas. A seguir, las células de cumulus fueron removidas y probables zigotos cultivados en gotas (50 μl) de medio BARC (experimento 1), complementado con AA en concentraciones de 0, 0,1, 1 y 10 μg/ml, durante la etapa 1 (5 a 72 horas pos-inseminación; h pi). En el experimento 2 y 3, iguales concentraciones de AA fueron agregadas al medio BARC, respectivamente en la etapa 2 (72 a 144 h pi) y la etapa 3 (144 a 192 h pi). Oocitos y embriones fueron incubados en estufa de CO₂ al 5%, 38,5°C y atmósfera húmeda. El desarrollo embrionario fue vigilado y los oocitos madurados que fertilizaron y alcanzaron los estados de mórula, blastocito y blastocito expandido fueron registrados a las 72, 144, 168 y 192 h pi, respectivamente, con base en las condiciones experimentales establecidas. ANOVA y test t de Bonferroni se utilizaron para análisis estadísticos, con p<0,05 como significativo. En el experimento 1, el AA en la concentración de 10 μg/ml produjo un mayor (p<0,05) porcentaje de mórulas (53,7%) blastocitos (37,2%) y blastocitos expandidos (28,1%) que los de los demás tratamientos, con resultados similares entre estos. Ninguna diferencia significativa ocurrió entre los tratamientos en los experimentos 2 y 3 para cualquier uno de los estados de desarrollo embrionario. Concluyendo, al añadir ácido ascórbico al medio de cultura BARC aumentó la producción de embriones bovinos in Vitro, probablemente a causa de su función en prevenir o disminuir los daños causados por la oxidación.