PRODUÇÃO DE EMBRIÕES BOVINOS in vitro EM MEIO DE CULTURA COM ÁCIDO ASCÓRBICO

Resumo

Este estudo foi conduzido para verificar os efeitos da adição de ácido ascórbico (AA) ao meio BARC utilizado para cultura in vitro de embriões bovinos. Folículos (2 a 7 mm de diâmetro) de ovários obtidos em frigorífico foram aspirados, e oócitos com no mínimo 3 a 4 camadas de células do cumulus e citoplasma homogêneo foram lavados três vezes em meio de maturação base (MM-b). Grupos de 15 a 25 oócitos foram maturados em gotas (100 mL) de MM-b, acrescido de 1 mg/mL de FSH (Folltropin) e 10% de SFB, sem PVA, por 24 horas. O meio m-DM foi utilizado tanto para o “swim-up” quanto para a fertilização in vitro; oócitos e espermatozóides foram co-incubados por 5 horas. A seguir, as células do cumulus foram removidas e prováveis zigotos foram cultivados em gotas (50 mL) de meio BARC (experimento 1), suplementado com AA nas concentrações de 0, 0,1, 1 e 10 mg/mL, durante a etapa 1 (5 a 72 horas pós-inseminação; h pi). No experimento 2 e 3, as mesmas concentrações de AA foram adicionadas ao meio BARC, respectivamente nas etapas 2 (72 a 144 h pi) e 3 (144 a 192 h pi). Oócitos e embriões foram incubados em estufa de CO₂ a 5%, 38,5°C e atmosfera úmida. O desenvolvimento embrionário foi monitorado e oócitos maturados que fertilizaram e atingiram os estágios de mórula, blastocisto e blastocisto expandido foram registrados às 72, 144, 168 e 192 h pi, respectivamente, de acordo com as condições experimentais definidas. ANOVA e teste t de Bonferroni foram empregados para as análises estatísticas, com p<0,05 aceito como significativo. No experimento 1, o AA na concentração de 10 mg/mL produziu uma maior (p<0,05) porcentagem de mórulas (53,7%), blastocistos (37,2%) e blastocistos expandidos (28,1%) do que os demais tratamentos, com resultados similares entre estes. Nenhuma diferença significativa foi observada entre os tratamentos nos experimentos 2 e 3 para qualquer um dos estágios de desenvolvimento embrionário. Concluindo, a adição de ácido ascórbico ao meio de cultura BARC aumentou a produção de embriões bovinos in vitro, provavelmente devido à sua função de prevenir ou diminuir os danos causados pela oxidação.